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    中檢維康iELisaT-2毒素檢測試劑盒

    簡要描述:中檢維康iELisaT-2毒素檢測試劑盒
    測定的基礎是抗原-抗體反應。微孔板上包被有偶聯抗原。分別加入T2毒素標準品或樣品、酶標記物和抗體于微孔中,樣品/標準品競爭結合抗體,酶標記物可與一抗結合,再于酶標版上的包被抗原結合。反應洗滌后,加入TMB底物顯藍色,加入終止液后顏色由藍變黃,用酶標儀在450nm處檢測,吸光值與樣品中T2毒素含量成負相關,與標準曲線比較即可得出T2毒素的含量。

    • 產品型號:CE107,96T
    • 廠商性質:生產廠家
    • 更新時間:2023-03-28
    • 訪  問  量:533

    詳細介紹

    品牌clover/科樂福產地類別進口
    應用領域環保,食品,生物產業,農業,制藥

     中檢維康iELisaT-2毒素檢測試劑盒

    1. 概要

    T2毒素(T2)是由多種鐮刀菌產生的一種霉菌毒素。主要污染小麥、大麥、玉米等糧食作物及其制品,對人類健康及畜牧業構成了較大危害。T-2毒素主要影響血液,肝臟,腎臟,胰腺肌肉及淋巴細胞的功能,T-2毒素中毒后的一般臨床癥狀為厭食、嘔吐、腹瀉、生長停滯、繁殖和神經機能障礙等。使用T2毒素試劑盒則能夠快速而準確的分析樣品中T2毒素殘留。

    1. 原理

    測定的基礎是抗原-抗體反應。微孔板上包被有偶聯抗原。分別加入T2毒素標準品或樣品、酶標記物和抗體于微孔中,樣品/標準品競爭結合抗體,酶標記物可與一抗結合,再于酶標版上的包被抗原結合。反應洗滌后,加入TMB底物顯藍色,加入終止液后顏色由藍變黃,用酶標儀在450nm處檢測,吸光值與樣品中T2毒素含量成負相關,與標準曲線比較即可得出T2毒素的含量。

    1. 試劑盒的組成
    1. 包被有抗原的96微孔板:1塊(96 孔,12×8 孔)
    2. T2毒素標準品:0ng/mL、0.5ng/mL、 1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、20ng/mL                        1 × 1.0mL
    3. T2抗體                      1 ×10mL
    4. 酶標記物                    1 ×10mL
    5. 10× 濃縮洗滌液:            1 × 50mL
    6. T2稀釋緩沖液A             1 × 50mL
    7. T2稀釋緩沖液B             1 × 50mL
    8. 顯色底物TMB              1 × 17mL
    9. 終止液:                     1 × 7mL
    10. 試劑盒說明書:               1
    11. 質檢報告:                   1
    1. 需要的儀器、試劑

    1)儀器   

    1. 酶標儀450nmiELisa全自動酶標儀或相當者)
    2. 微量移液器:20μL-200μL單道,100μL-1000μL單道, 50μL-300μL八道
    3. 多功能旋轉混合器(或者搖床、高速均質器)
    4. 酶標板振蕩器
    5. 渦旋混合器
    6. 50mL離心管
    7. 1.5mL離心管
    8. 定性濾紙
    9. 過濾漏斗
    10. 天平:感量0.01g
    1. 試劑
    1. 樣品提取液70%甲醇:取700mL甲醇,加300mL純水,混勻。
    1. 樣品處理

    5.1谷物(玉米、小麥、高粱、大米、大豆):

    1. 稱取5.0g粉碎樣品于50mL離心管中,加入25.0mL樣品提取液70%甲醇,置于多功能旋轉混合器上振蕩30分鐘(或使用高速均質器均質3分鐘,或搖床上振蕩40分鐘)。
    2. 將提取液用普通濾紙過濾,吸取100μL濾液置于1.5mL離心管中,加入900μL T2稀釋緩沖液A,用渦旋混合器混勻。

    稀釋倍數:50

    5.2飼料:

    1. 稱取5.0g粉碎樣品于50mL離心管中,加入25.0mL樣品提取液70%甲醇,置于多功能旋轉混合器上振蕩30分鐘(或使用高速均質器均質3分鐘,或搖床上振蕩40分鐘)。
    2. 將提取液用普通濾紙過濾,用0.22μm有機系濾膜過濾后,100μL濾液置于1.5mL離心管中,加入900uL T2稀釋緩沖液B,用渦旋混合器混勻。

    稀釋倍數:50

    6 酶聯免疫分析程序

    6.1測定之前注意事項

    1. 使用前將所有試劑平衡至室溫(20-25。
    2. 使用后迅速將試劑放入2-8冷藏。
    3. ELISA分析中的再現性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
    4. 所有溫育過程應避免陽光直射,并按要求用蓋板覆蓋住酶標板。

    6.2溶液的配制

    1. 提取液的配制: 根據實驗所需的量配制70%的甲醇水溶液(水要用純水、或蒸餾水、去離子水)
    2. 洗滌液的配制:將濃縮洗滌液用純水稀釋10倍后使用。(例如:取10 mL 濃縮液+90 mL純水, 可以用于32孔的檢測)。

    6.3測定程序

    1. 將足夠標準品和樣品所用數量的孔條插入酶標板架,標準品和樣品做兩個平行實驗,記錄下標準和樣品的位置。未使用的酶標板用鋁箔袋封好置2-8冷藏保存。
    2. 分別吸取50μL標準品和樣品加至相應的微孔(雙孔)中,然后再各加入50μL的酶標記物,后加入50μLT2抗體,裝入袋中密封,室溫(25℃)溫育20分鐘。
    3. 倒出孔中的液體,每孔加入250μL稀釋好的洗滌液洗滌,重復操作四次。洗板時每次間隔30s,洗完后用力在吸水紙上排干。
    4. 每孔加入100μL顯色底物,避光室溫(25℃)溫育10分鐘。
    5. 每孔加入50μL終止液,混勻。
    6. 置于酶標儀中,振蕩混勻,在450nm處測定吸光度值(OD值),參比波長630nm。(iELisa全自動酶標儀可以直接讀出、打印濃度值)。

    7.  結果判定

    1)所獲得的每個濃度標準溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以DI個標準(0標準)的吸光度值(B<蘇b>0)再乘以100%,即百分吸光度值。

     

    百分吸光度值(%)=

    B

    ×100%

    B<蘇b>0

    T2毒素標準品濃度值(ppb)為X軸,百分吸光度值為Y軸,繪制標準曲線圖。相對應每一個樣品的濃度可以從標準曲線上讀出。也可以用回歸方程法,計算出樣本溶液濃度。利用計算機專業軟件,更便于大量樣品的快速分析。

    1. 樣品的實際濃度為讀數結果乘以相應稀釋倍數。
    2. 如果測定值超出檢測范圍,樣品提取溶液按一定的比例用70%甲醇進行稀釋。

    8.  注意事項

    1. 室溫低于20或試劑及樣品未回到室溫(20- 25)會導致數值偏低。
    2. 在洗板過程中如果出現板孔干燥過久的情況,則會出現標準曲線不成線性,重復性不好的現象。所以洗板排干后應立即進行下一步操作。
    3. 標準物質和顯色液對光敏感,避免直接暴露在光線下。
    4. 混合要均勻,洗板要*(包括加樣品和標準液的時候都必需充分混合均勻)。
    5. 終止液為強酸性物質,避免接觸皮膚。
    6. 不要使用過了有效期的試劑盒,也不要混合使用不同批次的試劑盒,這樣會引起測定結果不準確。
    7. 試劑盒的儲存條件是2-8,切勿冷凍。

    9.  中檢維康iELisaT-2毒素檢測試劑盒的性能指標

    1. 檢測限LOD: 谷物10ppb(μg/kg),飼料15ppb,(LOD:空白樣品測定值+2倍標準偏差SD
    2. 定量限LOQ: 谷物25ppb,飼料30ppb。
    3. 定量檢測范圍:谷物25-1000ppb,飼料30-1000ppb。

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